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ELISA實(shí)驗(yàn)主要的五種方法實(shí)驗(yàn)原理

來(lái)源: 上海西格生物科技有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái) 2022/10/17 16:15:37 已瀏覽:
導(dǎo)讀:ELISA實(shí)驗(yàn)主要的五種方法實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme ed immunosorbent assay,簡(jiǎn)寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。主要有 5 種方法:雙抗夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、直接法、間接法、捕獲法實(shí)驗(yàn)原理。


1、雙抗夾心法:適用于大分子物質(zhì)的檢測(cè)。將已知的可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體表面,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法,具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。


2、競(jìng)爭(zhēng)法:競(jìng)爭(zhēng)法適用于較少表位的小分子物質(zhì)。將抗體包被于微孔板中,加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn),加入標(biāo)準(zhǔn)品和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。


3、直接法:主要用于抗原的檢測(cè),將抗原直接固定在固相載體上,洗滌后加入酶標(biāo)特異性抗體,洗滌后加入底物顯色,該方法對(duì)抗體的特異性要求較高。


4、間接法:主要用于抗體的檢測(cè)。將特異性抗原包被在固相載體表面,與標(biāo)本中相應(yīng)特異性抗體結(jié)合,洗滌后加入酶標(biāo)的抗體,洗滌后加入底物顯色。該方法對(duì)抗原的特異性要求較高。


5、捕獲法:捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型的檢測(cè)。先將針對(duì) IgM的第二抗體連接與固相載體,用以結(jié)合樣品中的所有 IgM,洗滌除去 IgG等無(wú)關(guān)的物質(zhì),然后加入特異性抗原與待檢 IgM結(jié)合,再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體,*形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,加酶底物顯色即可對(duì)樣品中待檢 IgM是否存在及其含量進(jìn)行測(cè)定。

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